产品货号:
WH0074
中文名称:
2×Pfu PCR预混反应液
英文名称:
2X Pfu PCR MasterMix
产品规格:
5mL(不含染料)|5mL(含染料)
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差。适用于高保真PCR反应、复杂模板如GC含量高(>60%),有二级结构等的扩增和大规模基因检测。
本制品使用方便快捷,能避免PCR操作过程中的污染,使用时只需取适量2×Pfu PCR预混反应液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使Mix溶液的浓度为1×即可进行反应。产品有含染料(蓝色)和无染料(无色)两种;加染料的产品反应完成后,产物可直接电泳。
- 基因检测:本制品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测,半定量PCR实验和微量DNA的检测。
- 高保真DNA扩增:如表达基因的克隆、基因的定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平。PCR产物为平端,纯化后,可加A处理再与TA载体连接或使用平末端克隆载体。
一个活力单位(U)是指在74℃、30min内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
组分 | 5mL(不含染料) | 5mL(含染料) |
2×Pfu PCR预混反应液(不含染料) | 5×1mL | - |
2×Pfu PCR预混反应液(含染料) | - | 5×1mL |
ddH2O | 5mL | 5mL |
保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。频繁使用时置于4℃可稳定保存3个月。
0.1U/μl Pfu聚合酶,500μM dNTP,50mM Tris-HCl(pH8.7),20mM KCl,4mM MgCl2,稳定剂和增强剂。
- 经检测无外源核酸酶活性;
- 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
- 室温(15~30℃)存放一周,无明显活性改变。
以下举例仅供参考,实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据实际情况,设定优化反应条件。
- 以人基因组DNA为模板,扩增1kb的片段,反应体系为25μL (如反应体系不同,可按此比例增加或减少用量)。
成分 用量 模板 <1μg Primer 1(10μM) 1μL Primer 2(10μM) 1μL 2×Pfu PCR预混反应液 12.5μL ddH2O 至25μL - PCR反应循环的设置:
温度 时间 循环数 94℃ 3min 1 94℃ 30sec 30 55℃ 30sec 72℃ 2min 72℃ 5min 1 - 结果检测:反应结束后取5μL反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
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